ساخت لنتی ویروسهای نوترکیب ناقل ژن هورمون رشد فیل ماهی (huso huso) و بررسی بیان ژن در رده سلولی بنیادی جنینی انسانی hek293t

thesis
abstract

ماهیان خاویاری به دلیل توانایی آنها در تولید خاویار (مروارید سیاه) از اهمیت ویژه ای در صنعت شیلات و آبزی پروری برخوردارند و از جمله با ارزش ترین ذخایر شیلاتی دریای خزر محسوب می شوند. در این مطالعه توالی کامل ژن کد کننده هورمون رشد (gh) فیل ماهی استروژن huso huso بعنوان یکی از مهمترین گونه های ماهیان خاویاری ایران، که با استفاده از rna استخراج شده از غده هیپوفیز سنتز شده بود، در یک وکتور غیر ویروسی (پلاسمید کلونینگ) ptz57r/t کلون گردید. سپس بر اساس سایتهای آنزیمی مشخص، این قطعه ژنی از این وکتور برش داده شده و به بدنه سازه لنتی ویروسیpnl-egfp/cmv-wpre پیوند زده شد. این سازه قادر به تولید تیترهای بالایی از ویروسهای نوترکیب بالغ و فعال حامل ژنgh فیل ماهی بوده و می تواند به نحوی بسیار کارآمد رده سلولهای جنینی انسانی hek-293t را آلوده ساخته، ژن هورمون رشد را به این سلولها منتقل کرده و منجر به بیان پروتئین در آنها گردد. در ساختار این وکتور ژن نشانگر egfp، بواسطه قطعه ires در فرودست ژن gh قرار داده شده است، لذا بیان ژن را در مراحل ترانسفکشن و ترانسدوکشن بسهولت می توان پیگیری نمود. به منظور انتقال ژن، سلولهای جنینی انسانی hek-293t با بهره گیری از ناقل ترانسفر لنتی ویروسی حامل ژنgh و ناقلین بسته بندی و غشایی ویروسی، به روش کمپلکس dna- لیپوفکتامین ترانسفکت شدند. 48 ساعت بعد سوپرناتانت ویروسی را با ستونهای پروتئینی amicon تغلیظ کرده تا استوک غلیظی از ویروسهای نوترکیب بدست آید. در حدود (یک پنجم کل استوک) به کشت جدیدی از سلولهای hek-293t اضافه شد و در حدود هفتاد دو ساعت بعد، بیان ژن egfp در نور فلورسنت پدیدار گشت. سپس سلولها برای آنالیزهای بعدی جمع آوری شدند. در مراحل بعدی rna این سلولها را استخراج کرده و با تکنیک rt-pcr، بیان ژن gh در آنها به اثبات رسید. نتایج این تحقیق می تواند از دیدگاه مولکولی در جداسازی و انتقال ژن به دیگر گونه های ماهیان خاویاری و افزایش رشد و تولید خاویار و نهایتاً تولید ماهیان ترنس ژنیک، نقش بسیار موثری داشته باشد.

First 15 pages

Signup for downloading 15 first pages

Already have an account?login

similar resources

کلونینگ ژن هورمون رشد (GH) فیل ماهی (Huso huso) در سازه های لنتی ویروسی و غیر ویروسی و بررسی بیان ژن در سلولهای بنیادی جنینی انسانی

یکی از مهمترین کاربردهای مهندسی ژنتیک در تحقیقات آبزی پروری، افزایش میزان رشد ماهیان پرورشی از طریق انتقال ترنس ژنهای هورمون رشد به آنهاست. اما پیش از هر گونه تلاش در جهت انتقال ژن، ساخت و سنتز این ترنس ژنهای مطلوب الزامی است. از این رو در این تحقیق، ابتدا لنتی ویروس های نوترکیب حاوی ژن هورمون رشد (GH)فیل ماهی Huso huso به عنوان یکی از مهمترین گونه های ماهیان خاویاری تولید شد، سپس از آنها برای ...

full text

کلونینگ ژن هورمون رشد (gh) فیل ماهی (huso huso) در سازه های لنتی ویروسی و غیر ویروسی و بررسی بیان ژن در سلولهای بنیادی جنینی انسانی

یکی از مهمترین کاربردهای مهندسی ژنتیک در تحقیقات آبزی پروری، افزایش میزان رشد ماهیان پرورشی از طریق انتقال ترنس ژنهای هورمون رشد به آنهاست. اما پیش از هر گونه تلاش در جهت انتقال ژن، ساخت و سنتز این ترنس ژنهای مطلوب الزامی است. از این رو در این تحقیق، ابتدا لنتی ویروس های نوترکیب حاوی ژن هورمون رشد (gh)فیل ماهی huso huso به عنوان یکی از مهمترین گونه های ماهیان خاویاری تولید شد، سپس از آنها برای ...

full text

ساخت لنتی ویروسهای نوترکیب ناقل ژن gdnf و بیان آن در سلولهای انسانی

بیماری پارکینسون دومین بیماری شایع در بین بیماری های زوال نورونی در اکثرکشورهای جهان است که حدود 1% جمعیت بالای 65 سال را گرفتار می کند. دلیل اصلی به وجود آمدن این بیماری تخریب پیش رونده نورون های دوپامین ساز در ناحیه substantia nigra pars compacta (snpc) در مغز میانی می باشد زیرا این سلول ها دوپامین می سازند و دوپامین یک نوروترانسمیتر شیمیایی است که سیگنال ها را به ناحیه striatumو سپس به نواحی...

15 صفحه اول

بررسی ترتیب سلولی بافت شبکیه چشم فیل ماهی Huso huso

فیل ماهی از با ارزشترین ماهیان اقتصادی دریای خزر است. بینایی یکی از مهمترین حسها، بخصوص در ماهیانی مانند H.huso است. با فرض اینکه فیل ماهی جانور کف‌زی، فاقد دید رنگی و تیزبینی کافی است ساختار شبکیه آن مورد مطالعه قرار گرفت. چنین مطالعه‌ای نه تنها اهمیت بینایی برای گونه ماهی را مشخص می‌نماید بلکه امکان ایجاد ارتباط قابل تاًمین بین تغذیه، محیط زندگی و رفتارهای اختصاصی جانور و بینایی فراهم می‌آورد...

full text

همسانه‌سازی ژن SOX2 انسانی در ناقل لنتی ویروسی و القای ژنی در سلول‌های HEK293T

  چکید ه   سابقه و هدف   ژن SOX2 در میان گونه‌ها، حفاظت شده بوده و از فاکتورهای مهم در القای سلول‌های پیش‌ساز از سلول‌های تمایز یافته می‌باشد که موجب حفظ خاصیت پرتوانی سلول‌های پیش‌ساز می‌شود. SOX2 ، OCT4 ، cMYC و KLF4 سبب باز برنامه‌نویسی سلول‌های سوماتیک به سلول‌های بنیادی می‌شوند. امروزه از ژن SOX2 در جهت تولید سلول­های iPS و سلول درمانی استفاده می‌شود. در این تحقیق همسانه‌سازی ژن SOX2 در نا...

full text

بررسی ترتیب سلولی بافت شبکیه چشم فیل ماهی huso huso

فیل ماهی (huso huso) به عنوان یک ماهی باستانی از باارزشترین ماهیان اقتصادی دریای خزر است. بینایی یکی از مهمترین حسها بخصوص، در ماهیانی مانند h.huso است که صید آن بوسیله دام انتظاری انجام می شود . با فرض اینکه فیل ماهی جانور کف زی، فاقد دید رنگی و تیزبینی کافی و مناسب است ساختمان چشم و سازماندهی شبکیه آن مورد مطالعه قرار گرفت. چنین مطالعه ای نه تنها اهمیت بینایی برای گونه ماهی را مشخص می نماید ب...

My Resources

Save resource for easier access later

Save to my library Already added to my library

{@ msg_add @}


document type: thesis

وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه علوم و فنون دریایی خرمشهر

Hosted on Doprax cloud platform doprax.com

copyright © 2015-2023